免疫组化IHC实验抗体选择要点

免疫组化IHC实验抗体选择

免疫组织化学（IHC）

免疫组织化学（或 IHC）是一种基于抗体的技术，用于检测结构和组织已保留的组织中的蛋白表达。Coons 等人于 1942 首次报告了 IHC 的使用，他们报告了开发荧光连接抗体来观察肺炎球菌。

免疫组织化学是利用抗原抗体的特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。IHC 利用抗体与抗原之间的关系，以显现蛋白表达原位。这种方法的独特之处在于它同时保留了一个组织样品的解剖和结构特征。这可以高分辨率地显现蛋白，及其在细胞以及各种亚细胞区室内的定位方式。简而言之，IHC 以一种相对简化直接，但极其通用的方式将免疫检测与先进的显微镜结合在一起。

免疫组化抗体选择要点

在设计免疫组化IHC实验时，抗体的选择是相当重要的。因为免疫组化试验的核心就是抗原与抗体的特异性结合,因此抗体的重要性就不言而喻。

1 一抗选择要点

 

(1) 选择单克隆还是多克隆抗体。在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对较低；而多克隆抗体特异性稍弱，抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色(可以通过封闭等有所避免)。

 

(2)种属来源。Human，Mouse，还是Rat。一般家兔来源的抗体多是多克隆；而小鼠来源的抗体多是单克隆，根据厂家说明书与后面的二抗来源最后决定。

 

（3）检测抗原的特性。根据样本的结构性质选择最适合的抗体，同时也要注意样本的稳定性，样品处理过程中是否会影响其结构，影响构象，最终影响抗体与抗原的亲和性。可以参考厂家推荐应用及文献。

 

2 二抗选择要点

 

(1) 种属来源。主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。

 

(2) 标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。一般SP三步法二抗选择Biotin标记的二抗，以与后面的SP结合反应；而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗，如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。这主要与后面有无三抗和三抗种类有关。

 

(3)选择IgM还是IgG。一般一抗是IgM，那么二抗就选择IgM；反之，一抗是IgG，则二抗选择IgG。

(4)生产厂家。进口抗体往往周期长价格高。目前国产抗体经过这么多年的技术发展和人员的成长，已经完全可以满足实验的需求。欧布泽抗体，拥有原核和真核蛋白表达和纯化平台，完成的兔单克隆抗体表达、重组、筛选和纯化平台，拥有自己的知识产权，完全可以替代进口抗体。

关于欧布泽：

关注公众号

联系博维斯